用于在酵母中生产重组IL-11的系统和方法
发布时间：2024-02-06 15:33:39 人气：10
用于在酵母中生产重组IL-11的系统和方法
专利类型：
发明授权
申请(专利)号：
CN201880014137.9
申请日：
2018-01-15
授权公告号：
CN110382524B
授权公告日：
2024-02-06
申请人：
南沙生物科技(香港)公司
地址：
中国香港干诺道中19-20冯氏大厦10层
发明人：
专辑：
工程科技Ⅰ辑
专题：
有机化工;化学
主分类号：
C07K14/54
分类号：
C07K14/54;C12N15/81;C12P21/02
国省代码：
81
页数：
45
代理机构：
北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：
张全信
优先权：
2017-01-16 US 62/446,762
国际申请：
2018-01-15 PCT/US2018/013708
国际公布：
2018-07-19 WO2018/132787 EN
进入国家日期：
2019-08-27
主权项：
1.产生IL-11的方法,其包括：将编码重组IL-11的表达载体引入酵母中,其中所述重组IL-11不是融合蛋白的形式；在诱导所述重组IL-11表达的条件下在培养基中培养所述酵母,其中所述重组IL-11是失活的重组IL-11；将上清液与所述培养基的固体分离；使所述上清液与足以以4％(w/v)和12％(w/v)之间的终浓度提供从而形成包括沉淀的悬浮液的量的聚乙二醇接触,所述聚乙二醇具有2,000D至20,000D的平均分子量,其中所述沉淀包括所述失活的重组IL-11；在包括4M至10M的盐酸胍的溶液中溶解所述沉淀,以产生粗IL-11溶液；在4至12的pH下将所述粗IL-11溶液的盐酸胍的浓度降低至0.7M或更少,并将所述粗IL-11溶液的蛋白质浓度降低至0.1mg/mL至10mg/mL,以产生包括活性重组IL-11的再折叠的IL-11溶液；使所述再折叠的IL-11溶液与阳离子交换介质接触；和从所述离子交换介质洗脱纯化的IL-11。
摘要：
重组IL-11在酵母中表达,然后通过沉淀、在变性剂存在下溶解沉淀并使溶解的蛋白质复性,从需氧发酵培养基中分离。通过阳离子交换和疏水性相互作用色谱进一步纯化复性rhIL-11,以提供具有高生物活性和低rhIL-11二聚体和氧化rhIL-11含量的高度纯化的rhIL-11。
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